当前位置：网站首页 » 导读 » 内容详情

考马斯亮蓝有毒吗新上映_考马斯亮蓝有毒吗?致癌吗(2024年12月抢先看)

内容来源：夯出奇迹所属栏目：导读更新日期：2024-12-02

考马斯亮蓝有毒吗

考马斯亮蓝染色法全攻略，实验达人必看！ 𐟌Ÿ实验原理：考马斯亮蓝染色法是一种利用考马斯亮蓝G250染料检测蛋白质的方法。这种染料能与蛋白质结合，适用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白凝胶的染色，也可用于Western Blot转膜后PAGE胶上残留蛋白的检测。 𐟓Œ操作步骤：清洗杂质：取出电泳后的蛋白胶，放入干净的器皿中，用纯水清洗三次，每次20秒。这一步是为了去除凝胶中的干扰杂质。如果胶比较厚，可以适当增加洗涤次数和延长洗涤时间。染色：倒出纯水后，加入适量的考马斯亮蓝超快染色液，使染液覆盖整个凝胶。将器皿放入水平摇床上震荡染色，直至看到清晰的蛋白染色条带（大约30分钟到2小时，时间主要取决于凝胶厚度）。观察色带：染色过程中要注意观察凝胶的变色情况，避免染色时间过长导致背景颜色过深。脱色：倒出染色液，用纯水振荡清洗30分钟。脱色时间越长，背景颜色越浅。根据实验需求调整脱色时间，如需要更低背景的凝胶，可用纯水脱色1小时以上或过夜。 𐟓Œ注意事项：考马斯亮蓝染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，操作过程中一定要佩戴手套，避免染料接触皮肤。考马斯亮蓝染料有毒性，不建议加热使用。操作后需妥善处理废弃物。染色前用纯水清洗能大大减少SDS等干扰杂质。染色后请尽快拍照，纯水长时间浸泡会导致蛋白和染料的流失。考马斯亮蓝染色一般是不可逆的，丽春红染色是可逆的，但丽春红用于转膜之后，对印迹膜的染色检测，各位同门可别用错了~ 𐟓Œ常见问题：凝胶背景颜色深：电泳时凝胶被污染，或者是染色操作时被污染。前者可以尝试更换新的电泳液，电泳槽内用纯水冲洗干净；后者可以使用专门的容器，使用前用纯水冲洗干净，或者操作时更换新的手套。蛋白条带太浓：样品上样浓度过高，可以对样品进行稀释。样品串样品孔，无法分析结果：电泳点样时飘出胶孔，可以更换点样专用吸头，将样品加到胶孔底部，制样时加入足量的loading buffer。以上就是本次经验分享，欢迎各位互联网师兄师姐在评论区交流，有无极品条带图让大家眼馋一下𐟘‰

如何高效快速地转膜（精简版） 𐟔 膜的选择选择合适的膜是Western blot成功的关键。根据你的实验方案、目标蛋白的特性以及分子大小，选择适合的膜材质、孔径和规格。常见的两种膜是硝酸纤维素膜（NC）和PVDF膜。它们的特性对比见图二。 𐟚€ 转膜方式转膜主要有两种方式：槽式湿转和半干转移。前者操作简单，转移效率高；后者适用于大胶的蛋白转移，且所用缓冲液较少。 𐟒堥ˆ˜操作 1️⃣ 将剪好的PVDF膜用无水甲醇润湿至少30秒。 2️⃣ 组装转膜三明治结构（如图所示）：黑面（负极）→海绵→3层滤纸→胶→转印膜→3层滤纸→海绵→红面（正极），每层之间不能有气泡。然后将三明治转移至电泳槽中（黑面对黑面），注意电极方向。 3️⃣ 加入转膜液：使用配置好的快速转膜液。 𐟒ᠥ🫩€Ÿ转膜液的优点高效安全：不使用甲醇，减少有毒试剂的使用。快速稳定：能在25-30分钟内完成转膜过程，产热量小，减少蛋白损失。兼容性好：兼容多种凝胶类型，如Laemmli胶、预制胶、FastPAGE、Bis-Tris胶等。 𐟓 建议事项转印电流建议设定为恒流400mA，一般25-30分钟可以将150kD以下蛋白完全转印；小于100kD蛋白20分钟即可完全转印；对于大于150kD蛋白，建议延长5-10分钟。凝胶浓度影响转印效率，对于胶浓度7.5%，20分钟即可完成转印；对于胶浓度10%，25-30分钟即可完成转印；对于胶浓度大于10%，建议延长5-10分钟。短时间转膜时不需要放冰上，否则会影响效率。转膜时，根据不同分子量蛋白选择相适应的凝胶浓度，原则是：高分子量蛋白选低浓度胶，低分子蛋白选择高浓度胶。检测多个蛋白时，建议切胶分别转膜。 𐟔 转膜效果确认方法转膜后，如果想确认转膜效果，可以继续试验，以下方法可供参考：丽春红S印迹膜染色法：带负电荷的丽春红S与带正电的氨基酸残基及蛋白的非极性区结合，形成红色条带。丽春红S与蛋白质的结合是可逆性的，红色染料很容易洗掉，不影响后续WB检测。考马斯亮蓝凝胶染色法：对转膜后的蛋白凝胶进行染色，以检测残留蛋白。推荐使用快速蛋白染色液，灵敏度高，仅1小时或更短时间即可完成染色，脱色直接用去离子水即可。预染蛋白Mark判断：实时监测，分子量做参照。