2、就干细胞本身而言，影响细胞活性的主要因素是什么

如电脑的中央处理器、汽车的发动机一样，干细胞培养技术的核心是其培养体系，也就是培养基。这也是决定干细胞活性的一个关键因素。如同婴幼儿的奶粉一样，是普通奶粉还是配方奶粉，对婴幼儿的发育和身体健康具有重要作用。培养基对干细胞制品的标准化也起着关键作用。干细胞也有年轻和衰老之分，因此，细胞的代数也是影响干细胞活性的一个重要因素。理论上讲，细胞代数越靠前，干细胞的干性也越强。但是，我们在培养干细胞过程中，干细胞有从组织微环境到体外培养环境的一个调整和适应过程，一部分不适应的细胞会被淘汰，所以在前两三代，干细胞的基因组不稳定，可能不宜临床应用。如通过核型分析我们发现，在前三代细胞中，干细胞存在异常核型的比例偏高。就间充质干细胞而言，临床应用的最佳代数应该在4~6代。

3、选择自体干细胞还是异体干细胞

从修复角度讲，选用自体干细胞更有优势，体现在不存在免疫排斥，更容易适应自体身体环境等。但也存在取材难、患病情况下干细胞数量减少，不容易分离培养等问题。考虑到间充质干细胞的通用性、低免疫原性和免疫调节功能，选用从脐带组织来源的异体间充质干细胞也具有现实的意义。

4、细胞输注途径、数量和周期如何确定

一般来讲，干细胞进入体内有以下五个途径：静脉输注；血管介入；病变部位直接注射；腔室内注射和蛛网膜下腔（腰穿）给药。选用哪种方式，应根据具体情况而定。如果病变部位确切，易于操作，建议病变部位直接注射为好，如糖尿病足的治疗，一般采用局部多点肌内注射，在临床已经确定了很好的治疗效果。对于多组织、多器官功能的修复，如糖尿病或糖尿病伴有并发症的治疗，建议采用静脉输注治疗。对于神经损伤修复治疗，大多数医疗机构的生物治疗中心倾向于将干细胞经腰穿注射到脑脊液中。认为脑脊液中没有免疫细胞，注射的干细胞不容易被排斥，同时脑脊液的主要功能是营养神经，这样更有利于神经的修复。然而从另外一种角度考虑，经腰穿注入干细胞是否对神经修复具有更好的效果，还需要进一步的临床实践来验证。例如，与血液系统相比，脑脊液中几乎不存在细胞，可能其环境并不适合细胞的生存，注入其中的干细胞的存活率怎样，需要进一步分析。从临床应用情况看，经蛛网膜下腔注入干细胞引起发热的比例明显要高于经静脉注入。分析其原因，可能是经蛛网膜下腔注入细胞时会有一定数量的细胞死亡，从而引起坏死吸收热。此外，除营养神经外，脑脊液的另一个重要功能是维持颅压的稳定。在注射干细胞时，操作不当可能会引起颅压的波动，因此也存在一定的风险。最近有研究发现，脑脊液还具有清理大脑垃圾的功能。研究发现，在休息时小鼠大脑运输管道的网络膨胀了60%，增加了脑脊液的流动，从而清理了β淀粉蛋白等代谢废物[8]。该研究成果被《科学》杂志评为2013年度全球科技十大突破之一。注入脑脊液中的干细胞是否影响该过程也不清楚。干细胞使用的数量和周期目前还没有统一的标准，可以参照相关的临床试验或根据情况自己确定并验证。

5、如何掌握最佳的治疗时机

疾病进程或组织损伤修复都是一个动态过程，干细胞疗法的目的就是帮助机体对抗疾病或修复损伤组织。因此，在疾病的进展中，或在机体本身对抗损伤的过程中，及时补充干细胞更有利于疾病治疗或损伤修复。损伤或病变的早期，损伤或病变区域微环境会比较恶劣，表现在缺血缺氧、氧化应激或炎症反应等多个方面，这时进行干细胞治疗可能不利于细胞的生存，影响治疗效果；而在损伤或病变的末期，自身修复已基本结束，损伤修复动态平衡基本停止，坏死组织或液化吸收，或纤维变性，这时用干细胞治疗效果将不会很明显。但是从“损伤-修复”的病理生理过程入手，我们可以对一些已经错过最佳治疗时机的患者，如病变部位已经纤维化或钙化，进行微小刺激，如针灸、电刺激等，或使用小剂量损伤性药物，再次人为造成局部的微小损伤，使损伤局部重新进入“损伤-修复”的动态过程（启动损伤修复机制），然后补充干细胞，将可能对失去最佳治疗时间的患者争取到新的机会，促进损伤组织的重新修复。

6、如何客观评价干细胞的临床疗效

目前大部分干细胞公司或临床生物治疗中心为了宣传需要，夸大干细胞疗效或只报道疗效显著的病例，缺乏系统的干细胞临床试验数据。干细胞并非万能药物，对任何病例都有效。如上所述，如果治疗时机掌握不好，可能达不到预期效果，相反还会有负面的效应。如最近研究报道，间充质干细胞输注可能加重肝纤维化或肝硬化。对干细胞疗效的评价应进行严格的多中心临床试验，获得客观可靠的临床数据。

7、干细胞疗法发展方向：个体化治疗或通用疗法、主要疗法或辅助疗法

各个组织器官都存在其发育或起源的干/祖细胞，每个患者或个体都有其自身疾病的特点。医学研究或疾病治疗的最终方向应该是个体化的，干细胞疗法也不例外。但发展针对特定患病人群的通用干细胞疗法有利于干细胞技术和产业的发展。如上所述，机体也存在通用型的干/祖细胞，如间充质干细胞和内皮祖细胞。在临床实践中，应根据患者具体情况，制定相应的治疗措施。关于干细胞疗法是主要疗法还是辅助疗法，笔者认为，目前可将干细胞作为常规疾病的辅助治疗手段，对于不治或难治性疾病，可以考虑作为一种选择治疗手段。

8、如何将干细胞治疗和常规治疗有机结合起来

既然目前考虑将干细胞疗法作为一种辅助或可供选择的疾病治疗手段，那么如何将干细胞疗法和常规疗法结合起来，是一个值得深入探索的问题。既要考虑常规药物对干细胞功能和活性的影响，又要把握联合使用的时机；既要考虑选用干细胞的类型，又要注意常用药物的使用剂量等。

9、在干细胞治疗疾病的临床实践中有哪些基础问题需要解

决总的来说，干细胞疗法还在起步阶段，在干细胞治疗疾病、康复保健的实践中，既要关心干细胞的疗效，又要关注一些基础性的问题，如在干细胞治疗糖尿病足时，注射干细胞后，患者早期的一个重要感觉是疼痛感减弱或消失，其中的原因值得进一步深入研究。此外，大部分应用间充质干细胞治疗的患者，在干细胞输注后睡眠都有明显改变。其中的原因是什么？我们知道，干细胞治疗疾病的主要原理是促进受损组织的修复。可以推测，干细胞在修复组织时，一定会启动机体的修复系统，使机体处于一种安静或休息的状态，以利于组织的修复和再生。就像小孩生长发育过程中，体重和身高的增长一定会发生在睡眠中一样。这是因为生长激素在黑夜或睡眠时会大量分泌，而在白天或运动时几乎不分泌。这很好理解，如果在运动或活动状态下进行组织修复，可能会发生修复错误或意外。如在运动中长个就有可能发生骨变形或其他更严重情况。我们生病后，一般都需要卧床休息，就是这个道理。从研究的角度讲，干细胞是如何启动机体的修复系统的，是否参与了生物时钟（昼夜节律）的调节，如诱导褪黑素的表达，是通过什么途径实现这些作用的，分泌了某种因子或直接参与等问题，都是非常值得研究的重要课题。

参考文献

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